학술논문
The mechanisms of murine macrophages activation by IS2 isolated from mutated yeast (Saccharomyces cerevisiae) cell wall
Document Type
Dissertation/ Thesis
Source
Subject
Language
English
Abstract
IS2, a soluble β-glucan isolated from mutated yeast (Saccharomyces cerevisiae) cell wall has been shown higher ability to enhance the immune response in our previous experiment compared with its wild type (WT).In this study, we aimed to elucidate the molecular mechanisms of IS2 activating murine macrophages for cytokine secretion and surface molecules induction. Cytokines (TNF-α and IL-6) were measured by ELISA, surface markers (CD80, CD86, CD40, MHC class Ⅱ, TLR2 and TLR4) expression were detected by FACs and MAPK (p38, JNK and ERK1/2) and IκB-α expression were analysed by Western blot.IS2 activated murine macrophage cell line RAW264.7 cells by up-regulation of surface molecules and cytokine secretion. IL-6 was decreased by inhibition of Syk phosphorylation, and TNF-α was shown increased. In the case of thioglycolate-elicited peritoneal macrophages from MyD88 knock out mouse, cytokines (TNF-α and IL-6) and phosphorylation of MAPK were decreased, and IκB-α expression was increased. These results indicate that the cytokine secretion by macrophages induced by IS2 is partially dependent on MyD88 pathway and Syk kinase phosphorylation, and Syk kinase and MyD88 adapter molecule regulate the cytokine secretion via MAPK and IκB-α.Further detailed studies focused on mechanisms of murine macrophages activation by IS2 will provide a good candidate in developing a potential anti-tumor agent.
본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae의 돌연변이체로부터 분리한 수용성 β-glucan인IS2와 wild type의 β-glucan 사이의 면역활성의 차이에 대하여 분자적 수준에서 확인하였다.IS2의 면역활성을 조사하기 위하여, murine macrophage의 cytokine 분비 및 세포표면분자의 발현을 확인하였다. ELISA 방법으로 cytokine(TNF-α, IL-6)을 측정하였고, 세포표면분자(CD80, CD86, CD40, MHC class II, TLR2, TLR4)는 FACs를 이용하여 확인하였으며, MAPK(p38, JNK, ERK1/2)와 IκB-α 의 발현은 western blot 방법으로 조사하였다.실험결과, IS2는 세포표면분자의 발현과 TNF-α 및 IL-6의 분비를 증가시킴으로써 Raw264.7 세포를 활성화하였으며, Syk의 인산화를 억제하였을 경우 IL-6는 감소하는 반면 TNF-α 는 보다 많이 발현함을 확인하였다. 또한, MyD88 knock out mouse의 복강세포에서, TNF-α 및 IL-6의 발현과 MAPK의 인산화는 감소되며, IκB-α는 증가됨을 확인하였다.이러한 연구결과를 종합해 볼때 IS2는 MyD88과 Syk인산화에 의해 murine macrophage를 활성화시킨다는 것을 알 수 있었다.
본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae의 돌연변이체로부터 분리한 수용성 β-glucan인IS2와 wild type의 β-glucan 사이의 면역활성의 차이에 대하여 분자적 수준에서 확인하였다.IS2의 면역활성을 조사하기 위하여, murine macrophage의 cytokine 분비 및 세포표면분자의 발현을 확인하였다. ELISA 방법으로 cytokine(TNF-α, IL-6)을 측정하였고, 세포표면분자(CD80, CD86, CD40, MHC class II, TLR2, TLR4)는 FACs를 이용하여 확인하였으며, MAPK(p38, JNK, ERK1/2)와 IκB-α 의 발현은 western blot 방법으로 조사하였다.실험결과, IS2는 세포표면분자의 발현과 TNF-α 및 IL-6의 분비를 증가시킴으로써 Raw264.7 세포를 활성화하였으며, Syk의 인산화를 억제하였을 경우 IL-6는 감소하는 반면 TNF-α 는 보다 많이 발현함을 확인하였다. 또한, MyD88 knock out mouse의 복강세포에서, TNF-α 및 IL-6의 발현과 MAPK의 인산화는 감소되며, IκB-α는 증가됨을 확인하였다.이러한 연구결과를 종합해 볼때 IS2는 MyD88과 Syk인산화에 의해 murine macrophage를 활성화시킨다는 것을 알 수 있었다.