부산대학교 도서관

El objetivo de esta tesis doctoral fue el análisis de la expresión del RNA de citoquinas en la glándula salival menor de pacientes con el síndrome de Sjögren primario (SSp). Se ha analizado 42 biopsias de glándula salival menor de pacientes con el SSp, 12 con un SSp probable y 30 con un SSp definido. El análisis del RNA total se realizó por normalización con retrotranscripción y reacción en cadena de polimerasa (RT-PCR), utilizando oligo-dt como sonda para la RT y sondas específicas para la amplificación de IL-2, IFN- g, IL-12, IL-18, IL-4, IL-10, TGF-b y TNF- a. Los resultados fueron analizado en relación al: 1.- Diagnóstico de SSp probable (12 pacientes) y SSp definido (30 pacientes), siguiendo los criterios diagnósticos europeos. 2.- Grado de afectación histológico, de acuerdo con la clasificación de Chisholm y Mason. 3.- Tiempo de evolución clínica, des del inicio de la sintomatología clínica hasta el momento de realizar la biopsia de glándula salival menor, realizando un corte arbitrario a los 12 meses de evolución clínica.Esta tesis doctoral demuestra la presencia de un patrón predominante Th1 de expresión linfocitario en la glándula salival menor de pacientes con el SSp, con la detección de IL-2 y IFN- g; y de los inductores de este patrón Th1, IL-12 y IL-18 en la mayoría de los pacientes con el SSp. No se detecto IL-4 en ninguna de las muestras estudiadas, descartando la presencia de un patrón Th2. También se detecto en la mayoría de las muestras IL-10, TGF- b y TNF- a, citoquinas pro-inflamatorias. No se detecto diferencias estadísticamente significativas en la comparación del perfil de citoquinas entre los pacientes con un SSp definido y probable, en relación con el grado de afectación histológica ni en relación a la formación o no de focos de infiltración linfocitario. En cambio, hay un incremento en la expresión de la IL-2 y del IFN-g, con significado estadístico, en los pacientes con más de 12 meses de evolución clínica.Conclusiones: 1.- No hay diferencias en la expresión del RNAm de citoquinas en la glándula salival menor en pacientes con el síndrome de Sjögren primario definida y probable. 2.- El patrón predominante de expresión de citoquinas en la glándula salival menor en pacientes con el síndrome de Sjögren primario es un patrón Th1. 3.- La IL-12 y la IL-18 son inductores del patrón Th1 en el síndrome de Sjögren. 4.- La expresión del RNAm de citoquinas no varía en relación al grado de afectación histológica ni en relación con el nombre de formación de focos. 5.- Los pacientes con el síndrome de Sjögren primario con más tiempo de evolución clínica presentaron un incremento significativo en la expresión del patrón Th1.
Objectives of this study were to examine the cytokine mRNA expression in minor salivary glands from patients with primary Sjögren's syndrome (pSS), searching for possible correlation with clinical parameters and to identify the dominant cytokine pattern in the different groups. Oral mucosa biopsy samples from 42 pSS patients were studied. Total RNA was analysed by normalized RT-PCR using oligo-dT as the RT primer and IL-2, IFN-gamma, IL-12, IL-18, IL-4, IL-10, TGF-beta and TNF-alpha-specific primers for amplification. Results were analysed taking into account: (1) biopsy grade I to IV (Chisholm's classification); (2) diagnosis of either definite pSS (n=30) or probable pSS (n=12), following the European classification criteria (ECC), and (3) length of disease evolution from the beginning of symptoms to the time of biopsy, using an arbitrary cut-off point of 12 months. This studied showed that Th1-related cytokines (IL-2, IFN-gamma, IL-12, IL-18, TNF-alpha) were present in most samples. IL-4 (Th2) was totally absent. Other regulatory cytokines (IL-10, TGF-beta) were detected in the majority of samples. No significant differences were found between definite and probable pSS nor between grades II, III, IV and fibrous tissue biopsies. A statistically significant increase of IL-2 (P=0.012) and IFN-gamma (P=0.019) was observed in samples from patients with longer disease evolution, whereas the two Th1-inducer cytokines IL-12 and IL-18 were equally and highly expressed in all samples. In conclusion, a predominant Th1 pattern of cytokines was observed in all pSS samples, irrespective of biopsy classification. In addition, a significant increase of Th1 cytokine expression frequency was associated with longer disease evolution.