학술논문
Diff-Quik 염색한 개 유선종양 세포흡인물도말 표본에서의 p53 면역세포화학염색을 이용한 종양의 진단적 평가 / Evaluation of p53 Immunocytochemistry in Diff-Quik Stained Aspirate Smears for Diagnosis of Canine Mammary Gland Tumors
Document Type
Dissertation/ Thesis
Author
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Subject
Language
English
Abstract
Objective: To determine the possibility of P53 immunochemistry in Diff-Quik stained aspirate smears of canine mammary gland tumors as a diagnostic tool for canine mammary gland tumors.Methods: Both cytological and histological samples were obtained from 40 samples with spontaneously developed mammary gland tumors. The cytological and histological specimens were examined by Diff-Quik and H&E stains, respectively. Cytologic specimens were evaluated as either benign or malignant, based on known cytologic criteria for malignancy. Immediately after surgically excision, the tumors were routinely processed for the histopathological evaluation. Histopathologic classification of tumor type was based on the WHO classification system for canine mammary tumors. After examination, cytological samples were immunostained using the p53 antibody. The p53 positive cells were calculated based on the percentage of positively stained tumor cells per 500 in cytology specimens, respectively. Results: P53 positive cells showed distinct, brown nuclear staining and p53staining was successful in 35 ⁄ 40 smears (87%). P53 index of histologically benign tumors is 3.57 ± 3.51% and that of histologically malignant tumors is 25.70 ±13.37% (P-value
이 연구의 목적은 이미 Diff-Quik으로 염색된 개 유선종양의 세포흡입 도말표본에 종양의 억제유전자인 p53을 추가로 면역세포화학 염색을 하고, 조직병리검사를 위한 표본을 채취 할 수 없는 상황에서 조직병리학적 검사 대신 p53을 이용한 면역화학 염색한 유선종양의 세포흡입 도말표본을 검사하여 유선 종양의 악성 여부를 판단하는 것이 가능한지를 연구하는 것이다. 자연 발생한 32마리의 유선종양 환자에서 얻은 40개의 세포흡입물을 도말하여 공기건조하고, 메탄올로 고정하여 Diff-Quick으로 염색하였다. 세포학 검사를 위한 표본은 악성종양에 대한 일반적인 세포학적 기준에 따라 검사하였다. 종양의 수술적 제거 후에 즉시 조직병리학적 검사를 실시하였고 종양의 조직병리학적 검사는 IDEXX 실험실에서 개 유선종양의 WHO 분류기준에 따라 실시하였다. P53 면역화학염색은 Diff-Quik 염색된 도말표본에 직접 실시하였다. Antigen retrieval 완충액으로 p53 염색에는 pH 6.0의 citrate 완충액을 이용하여 전자랜지에서 가열을 하였고, 가열 후 증류된 citrate buffer 용액은 교체를 하면서 5분간 2번의 가열을 하였다. 일차 항체의 적용시간은 4℃ overnight를 적용했다. Diaminobenzidine 발색시간은 대부분 1분 30초에서 2분 정도가 필요했다. H&E 염색으로 대조 염색을 하고, 건조와 봉입을 하였다. 면역세포화학 염색된 도말 표본에서 p53 양성 세포는 종양 세포의 핵이 갈색으로 염색이 되었다. 면역세포화학 염색 표본의 평가는 400배 시야의 현미경을 이용하여 무작위로 500개의 상피성 종양 세포 중 p53 양성세포 백분율을 구하는 것으로 평가하였다. 조직학적으로 양성 종양에서 P53 양성율은 3.57 ± 3.51% 이고 악성 종양은 25.70 ±13.37% (P-value
이 연구의 목적은 이미 Diff-Quik으로 염색된 개 유선종양의 세포흡입 도말표본에 종양의 억제유전자인 p53을 추가로 면역세포화학 염색을 하고, 조직병리검사를 위한 표본을 채취 할 수 없는 상황에서 조직병리학적 검사 대신 p53을 이용한 면역화학 염색한 유선종양의 세포흡입 도말표본을 검사하여 유선 종양의 악성 여부를 판단하는 것이 가능한지를 연구하는 것이다. 자연 발생한 32마리의 유선종양 환자에서 얻은 40개의 세포흡입물을 도말하여 공기건조하고, 메탄올로 고정하여 Diff-Quick으로 염색하였다. 세포학 검사를 위한 표본은 악성종양에 대한 일반적인 세포학적 기준에 따라 검사하였다. 종양의 수술적 제거 후에 즉시 조직병리학적 검사를 실시하였고 종양의 조직병리학적 검사는 IDEXX 실험실에서 개 유선종양의 WHO 분류기준에 따라 실시하였다. P53 면역화학염색은 Diff-Quik 염색된 도말표본에 직접 실시하였다. Antigen retrieval 완충액으로 p53 염색에는 pH 6.0의 citrate 완충액을 이용하여 전자랜지에서 가열을 하였고, 가열 후 증류된 citrate buffer 용액은 교체를 하면서 5분간 2번의 가열을 하였다. 일차 항체의 적용시간은 4℃ overnight를 적용했다. Diaminobenzidine 발색시간은 대부분 1분 30초에서 2분 정도가 필요했다. H&E 염색으로 대조 염색을 하고, 건조와 봉입을 하였다. 면역세포화학 염색된 도말 표본에서 p53 양성 세포는 종양 세포의 핵이 갈색으로 염색이 되었다. 면역세포화학 염색 표본의 평가는 400배 시야의 현미경을 이용하여 무작위로 500개의 상피성 종양 세포 중 p53 양성세포 백분율을 구하는 것으로 평가하였다. 조직학적으로 양성 종양에서 P53 양성율은 3.57 ± 3.51% 이고 악성 종양은 25.70 ±13.37% (P-value