학술논문
刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性的比较研究 / Construction of Toxoplasma gondii SRS29C nucleic acid vaccine and comparative study of the immunoprotection of SRS29C and SAG1 combination
Document Type
Academic Journal
Author
叶建军; 田静; 高传亮; 闫安; 叶利颖; 王宇冰; 宋淇淇; YE Jianjun; TIAN Jing; GAO Chuanliang; YAN An; YE Liying; WANG Yubing; SONG Qiqi
Source
黑龙江畜牧兽医 / Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine. (21):18-25
Subject
Language
Chinese
ISSN
1004-7034
Abstract
为了探究刚地弓形虫表面蛋白(surface antigen,SAG)SRS29C基因和SRS29C、SAG1 联合基因的核酸疫苗对小鼠急性感染弓形虫的免疫保护效果,试验利用PCR方法扩增了SRS29C基因片段并将其克隆至真核表达载体pEGFP-N1 中,构建重组质粒pEGFP-SRS29C,并对该质粒进行酶切鉴定,同时用该质粒对HEK293T细胞进行转染,再用Western-blot方法检测目标蛋白在细胞中的表达情况;用重组质粒pEGFP-SRS29C 和pEGFP-SAG1 单独免疫或联合免疫小鼠,用ELISA法测定血清IgG水平,CCK-8 法检测脾淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪测定CD4+和 CD8+T 淋巴细胞百分比,ELISA试剂盒检测脾脏细胞因子的表达情况;进行小鼠体内攻虫试验,记录小鼠存活时间.结果表明:成功构建了重组质粒pEGFP-SRS29C,表达的蛋白质大小为66 ku;pEGFP-SRS29C组和联合免疫组与PBS组和空载体组相比血清IgG含量、脾淋巴细胞增殖率、CD4+/CD8+值均显著提高(P＜0.05);pEGFP-SRS29C组和联合免疫组γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量明显提高;联合免疫组诱免疫球蛋白G(IgG)、IFN-γ和TNF-α含量均高于pEGFP-SRS29C组和pEGFP-SAG1 组.PBS组和空载体组小鼠存活8～9 d;pEGFP-SRS29C组小鼠存活(18.10±1.37)d,pEGFP-SAG1 组小鼠存活(21.20±0.97)d,联合免疫组小鼠存活(24.20±1.72)d,极显著长于PBS组和空载体组(P＜0.01).说明单独使用构建的弓形虫核酸疫苗pEGFP-SRS29C或与pEGFP-SAG1 联合使用能够诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,增强小鼠抵抗弓形虫感染的能力,并且SRS29C作为保护性抗原与SAG1 联合免疫的效果更好.