학술논문
长链非编码RNA NORAD在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖能力的影响 / Expression of long non-coding RNA NORAD in lung cancer and its effect on lung cancer cell proliferation
Document Type
Academic Journal
Author
Source
海南医学 / Hainan Medical Journal. 34(9):1217-1224
Subject
Language
Chinese
ISSN
1003-6350
Abstract
目的 研究长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(NORAD)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖的影响.方法 RNA-seq分析肺癌组织中LncRNA及miRNA的表达改变,根据表达量确定候选LncRNA;qRT-PCR检测分析肺癌组织及肺癌细胞中候选NORAD的表达;免疫荧光检测分析肺癌组织中细胞增殖核抗原Ki-67的表达;通过线性回归分析肺癌组织中NORAD与Ki-67的表达相关性.生物在线软件联合miRNA测序结果,并通过荧光素酶检测分析NORAD与miR-26b-5p、miR-654-5p结合情况.将A549细胞分成空白对照组(Control)、si-NORAD组、miR-26b-5p mimics、miR-654-5p mimics、si-NORAD与miR-26b-5p mimics联合组、si-NORAD与miR-654-5p mimics联合组,利用EdU检测细胞增殖能力、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡、蛋白印迹(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白(Bad、Bcl-2、Cleaved Caspase-3)的表达.结果 NORAD在肺癌组织及肺癌细胞中的表达均显著升高(均P<0.01),其表达量与Ki-67的表达呈正相关(r=0.646,P<0.01).miR-26b-5p、miR-654-5p在肺癌组织及细胞中的表达均显著降低(均P<0.01),生物在线软件及荧光素酶检测验证,NORAD与miR-26b-5p、miR-654-5p存在结合位点;在肺癌组织中,miR-26b-5p(r=-0.403,P=0.000)、miR-654-5p(r=-0.423,P=0.000)的表达与Ki-67的表达均呈负相关;miR-26b-5p(r=-0.435,P<0.05)与miR-654-5p(r=-0.395,P<0.05)的表达与NORAD表达均呈负相关.与Control组比较,si-NORAD可显著抑制A549细胞的增殖(P<0.01)、促进其凋亡(P<0.01),Bad及Cleaved caspase-3的表达均显著升高(均P<0.01),Bcl-2的表达显著降低(P<0.05);与si-NORAD组比较,si-NORAD与miR-26b-5p mimics联合组、si-NORAD与miR-654-5p mimics联合组可进一步抑制细胞增殖(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01).结论 肺癌中NORAD的表达显著上调,可能通过抑制miR-26b-5p、miR-654-5p的表达而促进肺癌细胞增殖,NORAD可能作为肺癌的诊断标志物.