학술논문
低毒剂量丹参酮ⅡA联合顺铂通过下调糖酵解途径抑制A549/DTPs的形成 / Low-toxic dose of tanshinone ⅡA combined with cisplatin inhibits the formation of A549/DTPs by down-regulating glycolysis pathway
Document Type
Academic Journal
Author
Source
山西医科大学学报 / Journal of Shanxi Medical University. 53(3):257-264
Subject
Language
Chinese
ISSN
1007-6611
Abstract
目的 探讨低毒剂量丹参酮ⅡA联合顺铂对药物耐受人肺腺癌A549持留细胞(A549/DTPs)的影响及与糖酵解途径的关系.方法 ①用4μg/ml(IC50)顺铂处理A549细胞10 d,构建顺铂诱导的A549/DTPs模型;采用CCK-8法检测A549、A549/DTPs对顺铂的耐受情况.②采用CCK-8法检测丹参酮ⅡA、顺铂以及两药联用对A549/DTPs的细胞抑制率,筛选低毒剂量丹参酮ⅡA、顺铂以及两药联用对A549/DTPs作用的终浓度,并通过Isobologram分析两药联用的协同作用.③将A549/DTPs分为4组:对照组、顺铂组、低毒剂量丹参酮ⅡA组、低毒联合组(低毒剂量丹参酮ⅡA联合顺铂组).采用CCK-8法检测细胞抑制率;ATP含量检测试剂盒检测ATP含量;qRT-PCR和Western blot法检测葡萄糖转运蛋白(GLUT4)、己糖激酶(HK2)、果糖磷酸激酶(PFKFP3)和丙酮酸激酶(PKM2)蛋白和mRNA的表达情况.结果 ①CCK-8结果显示:当顺铂浓度≥0.5μg/ml时,与A549细胞比较,A549/DTPs的细胞抑制率降低(P<0.05).②CCK-8结果显示:与单用顺铂比较,浓度≥0.1μg/ml顺铂联合低毒剂量丹参酮ⅡA后细胞抑制率升高(P<0.05).故选择0.1μg/ml顺铂联合20μg/ml(IC10)丹参酮ⅡA进行后续实验研究,Isobologram分析结果表明低毒剂量丹参酮ⅡA联合顺铂对A549/DTPs有协同作用.③与对照组相比,低毒剂量丹参酮ⅡA组和顺铂组ATP含量、GLUT4、HK2、PFKFP3和PKM2的mRNA和蛋白水平差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,低毒联合组ATP含量降低,GLUT4、HK2、PFKFP3和PKM2的mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05);与低毒联合组相比,低毒剂量丹参酮ⅡA组和顺铂组细胞抑制率降低,ATP含量升高,GLUT4、HK2、PFKFP3和PKM2的mRNA和蛋白水平均上调(均P<0.05).结论 低毒剂量丹参酮ⅡA联合顺铂抑制A549/DTPs形成,即抑制顺铂诱导的DTPs形成,可能与糖酵解途径有关.