학술논문
猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白单克隆抗体制备及抗原表位鉴定 / Production and Epitope Characterization of Monoclonal Antibodies against GP3 Protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus
Document Type
Academic Journal
Author
袁丽; 孙杨杨; 张路捷; 张杰; 孙海凤; 白娟; 姜平; YUAN Li; SUN Yangyang; ZHANG Lujie; ZHANG Jie; SUN Haifeng; BAI Juan; JIANG Ping
Source
畜牧兽医学报 / Acta Veterinaria Et Zootechnica Sinica. 54(8):3424-3434
Subject
Language
Chinese
ISSN
0366-6964
Abstract
旨在制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP3 蛋白单克隆抗体及解析其抗原表位.本研究构建了PRRSV类 NADC30 毒株 FJ1402 的 GP3 大肠杆菌表达质粒,制备获得重组 GP3 蛋白.经过免疫 BALB/c 小鼠和间接 ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞.利用间接免疫荧光试验和蛋白印迹鉴定单克隆抗体特异性.通过构建 GP3 蛋白基因截短体和合成多肽 ELISA鉴定单克隆抗体识别的表位区域.结果显示,成功筛选了 7 株稳定分泌 GP3 蛋白抗体的杂交瘤细胞株,7 株单克隆抗体均可与PRRSV FJ1402 产生特异性反应.鉴定出GP3 蛋白 4 个抗 原 表 位,分 别 为55PLCPTRQAAAEILE68、69PGKSFWCRI77、78GHDRCSESDH87 和88 DELGFMVPPGLSS100.2E12 单抗与 FJ1402、BB0907 和S1 三个谱系毒株均可发生IFA和Western blot特异反应,4H9、9F3 和 6B3 单抗只与 FJ1402 毒株反应,而不与 BB0907 和 S1 毒株反应.本研究研制成功 7 株 GP3 蛋白单克隆抗体,并鉴定出 4 个GP3 蛋白抗原表位,为PRRSV检测和 GP3 蛋白功能研究提供了重要工具.