학술논문
偏穗鹅观草RT-PCR内参基因筛选及验证 / Selection and Validation of Reference Genes for RT-PCR Analysis in Roegneria komarovii
Document Type
Academic Journal
Author
张宝蓉; 解继红; 金丹青; 汪军成; 姚立蓉; 司二静; 尚勋武; 王化俊; 李葆春; ZHANG Baorong; XIE Jihong; JIN Danqing; WANG Juncheng; YAO Lirong; SI Erjing; SHANG Xunwu; WANG Huajun; LI Baochun
Source
中国农业科技导报 / Journal of Agricultural Science and Technology. 25(6):32-39
Subject
Language
Chinese
ISSN
1008-0864
Abstract
偏穗鹅观草(Roegneria komarovii Nevski)是小麦族鹅观草属的植物,具有抗旱、抗病等特点,是多年生优良牧草,也是小麦三级资源库.为分析偏穗鹅观草耐盐机制及抗病基因的表达,筛选出偏穗鹅观草在不同非生物胁迫条件下稳定表达的内参基因,以偏穗鹅观草根、茎、叶对照组及盐胁迫处理组的偏穗鹅观草为材料,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,对肌动蛋白(Actin1、Actin2、Actin3)、微管蛋白(BUTB)、亲环素(Cyclophilin)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate,GAPDH)、组蛋白(histone 3,H3)、延伸因子(EF1a1)8个常用小麦内参基因进行筛选;并借助geNorm、BestKeeper 软件对内参基因表达的稳定性进行评价,进一步利用SnRK2基因对获得的内参基因的稳定性和可靠性进行验证.结果表明,2个软件筛选出的内参基因基本一致,8个候选内参基因在偏穗鹅观草不同胁迫处理下的表达丰度及稳定性存在差异,盐处理及干旱处理下Cyclophilin、GAPDH稳定性表现最好,高温处理下EF1a1、Cyclophilin稳定性最好.综合分析表明,Cyclophilin、GAPDH及EF1a1在偏穗鹅观草中表达丰度相对较高,并且在器官中表达较为稳定.通过对盐、高温及干旱处理组的稳定性评价,确定Cyclophilin为偏穗鹅观草最适内参基因.研究结果为后续探讨偏穗鹅观草抗逆性分子机制奠定了基础.