학술논문
致牛腹泻主要病毒多重实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 / Establishment and Application of Multiplex Real-time Fluorescence PCR Method for Detecting Major Viruses Causing Bovine Diarrhea
Document Type
Academic Journal
Author
张梦媛; 钟林翰; 韩言言; 刘伊湄; 李沫萱; 王美; 李园; 徐义刚; ZHANG Meng-yuan; ZHONG Lin-Han; HAN Yan-yan; LIU Yi-mei; LI Mo-xuan; WANG Mei; LI YUAN; XU Yi-gang
Source
动物医学进展 / Progress in Veterinary Medicine. 44(11):26-32
Subject
Language
Chinese
ISSN
1007-5038
Abstract
为鉴别检测引起牛病毒性腹泻的4种主要病原牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCV)、牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)和牛细小病毒(Bovine parvovirus,BPV),分别以BCV Nsp10基因、BVDV 5′UTR基因、BRV VP6基因和BPV VP2基因为靶基因设计引物,建立了检测上述4种病毒的实时荧光定量PCR方法.结果显示,方法的特异性强,仅检测靶标病毒的结果为阳性;方法的灵敏度高,对4种病毒BCV、BVDV、BRV和BPV相应质粒的最低检出限分别为7.77×102、7.11×101、1.74×102和2.53×102 copies/μL,且重复性良好,批内和批间变异系数均小于1.0％.由于上述病毒存在交叉感染的情况较多,因此建立多重荧光定量PCR,并利用建立的多重实时荧光定量PCR方法对采集的230份牛腹泻临床样本进行检测,BVDV、BCV、BRV和BPV的阳性率分别为66.96％、3.48％、18.26％和9.57％;且存在多病毒混合感染情况,其中BVDV和BRV混合感染率为10.43％,BVDV和BPV混合感染率为3.48％,BVDV、BCV和BRV混合感染率为1.74％,BVDV、BCV和BPV混合感染率为0.87％,BVDV、BRV和BPV混合感染率为0.87％.研究建立的多重实时荧光定量PCR方法具有良好的特异性、灵敏性,可为病毒性牛腹泻的快速诊断和流行病学调查提供的技术支持.