학술논문
草鱼CD8α、CD207基因重组真核表达质粒的构建与表达分析 / Construction and expression analysis of recombinant eukaryotic expression plasmids of CD8α and CD207 genes in Ctenopharyngodon idella
Document Type
Academic Journal
Author
田丁; 李珂珂; 蒋飞; 陈春秀; 念子清; 吴志新; 陈孝煊; TIAN Ding; Li Keke; JIANG Fei; CHEN Chunxiu; NIAN Ziqing; WU Zhixin; CHEN Xiaoxuan
Source
水产学报 / Journal of Fisheries of China. 46(5):750-759
Subject
Language
Chinese
ISSN
1000-0615
Abstract
为进一步研究CD8α、CD207在草鱼树突状细胞(dendritic cells,DCs)中的功能,实验构建了草鱼CD8α、CD207基因重组真核表达质粒并在草鱼DCs中成功表达.采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从草鱼DCs中获得CD8α、CD207开放阅读框序列(ORF),分别插入真核表达质粒pcDNA3.1,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CD8α、pcDNA3.1-CD207;经测序鉴定正确后,采用脂质体法将重组真核表达质粒分别转染至草鱼树突状细胞,经细胞免疫荧光技术和蛋白免疫印迹(Western blot)法验证CD8α、CD207的表达.结果显示,在蛋白免疫印迹实验中CD8α、CD207蛋白可正常表达,且大小与预测结果一致.细胞免疫荧光结果显示,CD8α、CD207蛋白主要在草鱼DCs的细胞膜上表达.本研究成功构建pcDNA3.1-CD8α、pcDNA3.1-CD207重组真核表达质粒,为后续研究CD8α、CD207基因在DCs中的作用机制奠定了基础.