학술논문
miR-10b通过下调KLF10促进高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT / miR-10b promotes high glucose-stimulated epithelial-mesenchymal transi-tion of renal tubular epithelial cells by repressing KLF10 expression
Document Type
Academic Journal
Author
张黎黎; 吕军; 杨荟; 付莎; 李劲高; 黄蓉; 宛霞; 徐安平; ZHANG Li-li; LüJun; YANG Hui; FU Sha; LI Jin-gao; HUANG Rong; WAN Xia; XU An-ping
Source
中国病理生理杂志 / Chinese Journal of Pathophysiology. 35(7):1254-1260
Subject
Language
Chinese
ISSN
1000-4718
Abstract
目的:探讨微小RNA-10b(miR-10b)在高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用及相关机制.方法:通过RT-qPCR法分析2型糖尿病合并肾纤维化患者肾组织中miR-10b的表达量;利用高糖刺激人肾小管上皮细胞HK-2建立EMT模型,RT-qPCR法检测miR-10b在EMT不同阶段的表达水平.在HK2细胞中分别转染miR-10b模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)24 h后,再给予高糖刺激,相差显微镜观察细胞形态学改变,Western blot法检测纤连蛋白(fibronectin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)等EMT标志蛋白的表达.通过在线数据库miRBase对miR-10b的作用靶点进行预测,并利用双萤光素酶报告基因实验进行验证.结果:与癌旁正常肾组织相比,2型糖尿病合并肾纤维化患者肾组织中miR-10b的表达明显增加(P<0.01).在高糖刺激诱导的HK-2细胞EMT中,miR-10b的表达呈现时间依赖性上调(P<0.01).转染miR-10b inhibitor可抑制高糖诱导的HK-2细胞形态学改变以及EMT标志蛋白fibronectin、SLUG、N-cadherin和SNAI1表达的上调.在线数据库预测KLF10的3'-UTR可以与miR-10b结合,该结果被双萤光素酶报告基因实验证实.同时,KLF10过表达可以逆转高糖诱导的肾小管上皮细胞的形态学改变以及fibronectin和N-cadherin等EMT标志蛋白.进一步研究显示,miR-10b是通过抑制KLF10表达,从而激活TGF-β/Smad3通路发挥作用.结论:miR-10b可通过下调KLF10表达促进高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT.