학술논문
鸽圆环病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用 / Establishment and Application of Fluorescent Quantitative PCR Assay for Pigeon Circovirus
Document Type
Academic Journal
Author
李晓波; 王吉; 王莎莎; 李威; 秦骁; 黄宗文; 岳秉飞; 王淑菁; 付瑞; LI Xiaobo; WANG Ji; WANG Shasha; LI Wei; QIN Xiao; HUANG Zongwen; YUE Bingfei; WANG Shujing; FU Rui
Source
实验动物科学 / Laboratory Animal Science. 39(4):28-32
Subject
Language
Chinese
ISSN
1006-6179
Abstract
目的 建立鸽圆环病毒(PiCV)TaqMan探针荧光定量PCR方法并对其进行初步应用.方法 通过比对NCBI发表的PiCV各分离株序列,选取其polymerase基因保守序列设计引物探针,建立PiCV的荧光定量PCR方法,对方法的特异性及敏感性进行验证;取浓度为3.48×105和3.48×104copies/μL的质粒标准品,每个浓度做6个平行,重复检测3次,计算组内和组间变异系数,验证方法的重复性和稳定性;用该方法检测采自北京某养殖场的鸽肝、脾、肺、法式囊样本各40份及鸽盲肠样本36份,以验证此方法在实际应用中的检测能力.结果 建立的PiCV荧光定量PCR方法在3.48×107～3.48×101 copies/μL范围Ct值与质粒浓度呈线性关系,标准曲线Slope为-3.381,R2值为1,扩增效率为97.61％.可检测到的PiCV最低浓度为34.8 copies/μL,与常规PCR法相比,检测灵敏度高2个数量级;以猪圆环病毒2型、禽腺病毒I型及Ⅲ型、禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生性病毒为模板均无扩增曲线;重复检测3.48×105和3.48×104 copies/μL两个浓度的质粒标准品,组内变异系数小于1.63％,组间变异系数小于7.23％.用建立的荧光定量PCR方法检测鸽组织样本,肝、脾、肺、法式囊及盲肠阳性率分别为97.5％、100％、100％、100％、97.2％,经卡方检验,各组织病毒含量无显著差异(P>0.05).结论 建立的鸽圆环病毒荧光定量PCR方法可有效检测鸽组织中的PiCV,为实验鸽相关微生物标准的制定提供了技术支持和基础数据.