학술논문
利用GST pull-down联合质谱技术鉴定H7N9禽流感病毒PA-X的互作蛋白 / Identification of Proteins Interacting with PA-X from H7N9 Avian Influenza Virus by GST pull-down Combined with Mass Spectrometry
Document Type
Academic Journal
Author
徐国双; 姜童潇; 郭艺迪; 段铭; 张茂林; 关振宏; XU Guoshuang; JIANG Tongxiao; GUO Yidi; DUAN Ming; ZHANG Maolin; GUAN Zhenhong
Source
广东农业科学 / Guangdong Agricultural Sciences. 49(1):121-127
Subject
Language
Chinese
ISSN
1004-874X
Abstract
[目的]为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白.[方法]构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进行纯化得到GST-PA-X融合蛋白.利用GST pull-down技术,将GST-PA-X和GST对照蛋白分别与A549细胞裂解液总蛋白进行体外孵育,得到的蛋白复合物经SDS-PAGE分离后进行质谱检测分析.[结果]经GST pull-down筛选与质谱分析鉴定后得到39个高可信度的可能与PA-X互作的候选蛋白质.通过GO注释和KEGG等通路富集分析发现,这些蛋白主要参与RNA的代谢及加工、mRNA翻译及运输、多肽生物合成及基因表达的转录后调节等生物学过程.对其中评分最高的蛋白Hsp70-2与PA-X的相互作用作进一步验证,免疫荧光试验结果表明Hsp70-2与PA-X可以在细胞浆中共定位.[结论]利用GST pull-down联合质谱技术筛选到39种与PA-X互作的候选蛋白,且经免疫荧光试验证明候选蛋白Hsp70-2与PA-X存在共定位,为深入探讨PA-X在AIV生命周期中的作用机制奠定基础.