학술논문
鸡CMPK2的原核表达及其抗H9N2禽流感病毒的初步研究 / Preliminary study on the expression of chicken CMPK2 and its resistance to H9N2 avian influenza virus
Document Type
Academic Journal
Author
李鑫; 刘炜玮; 谭磊; 孙英杰; 宋翠萍; 廖瑛; 丁铲; 仇旭升; 徐成刚; LI Xin; LIU Wei-wei; TAN Lei; SUN Ying-jie; SONG Cui-ping; LIAO Yin; DING Chan; QIU Xu-sheng; XU Cheng-gang
Source
中国预防兽医学报 / Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine. 44(8):861-867
Subject
Language
Chinese
ISSN
1008-0589
Abstract
为研究鸡CMPK2基因的遗传进化特点和生物学功能,本研究以鸡成纤维细胞系(DF-1)为模板,通过RT-PCR扩增鸡CMPK2基因完整阅读框(ORF)(762 bp),利用MEGA7软件对CMPK2氨基酸序列进行同源性和遗传进化分析.并构建了重组质粒p3xFLAG-CMV-14-CMPK2和重组原核表达载体pET-28a-CMPK2,利用原核载体表达CMPK2目的蛋白后制备小鼠抗鸡CMPK2的多克隆抗体,并采用western blot检测其反应性.构建的CMPK2氨基酸序列进化树结果显示,鸡CMPK2与爬行类动物CMPK2遗传关系较近,而与哺乳动物CMPK2氨基酸序列的遗传距离相对较远.为研究鸡CMPK2是否具有抗病毒功能,利用H9N2禽流感病毒(AIV)感染DF-1细胞,感染后6h、12 h时分别采用荧光定量PCR及western blot方法检测鸡CMPK2基因转录水平和蛋白表达情况,结果显示H9N2 AIV感染能够引起鸡CMPK2 mRNA转录水平和蛋白表达水平的明显上调.进一步利用DF-1细胞过表达CMPK2及利用特异性siRNA干扰CMPK2的表达后,分别采用荧光定量PCR及western blot检测鸡CMPK2蛋白对H9N2 AIV复制的影响.荧光定量PCR以及western blot结果显示,过表达鸡CMPK2蛋白可以抑制H9N2 AIV的增殖.而下调鸡CMPK2蛋白的表达后H9N2 AIV增殖水平显著上升(P＜0.01).上述结果首次证实,鸡CMPK2是H9N2 AIV复制的负调控因子,能够抑制AIV的复制.本研究丰富了 AIV与抗病毒宿主因子的研究内容,也可为抗禽类病毒感染药物靶点的研究提供重要参考.