부산대학교 도서관

Objetivo: determinar la presencia de ADN de Trypanosoma cruzi en muestras de sangre de seropositivos a la enfermedad de Chagas, procedentes de Bagua - Amazonas, por la técnica LAMP. Métodos: se analizaron 20 muestras de sangre impregnadas y conservadas en papel FTA. En el aislamiento del ADN, se empleó 2 discos de papel de 6 mm de diámetro (~20 uL de sangre) y se siguió el protocolo modificado del kit PureLink Genomic DNA. La concentración de ADN fue medida por espectrofotometría de U.V. a 260 nm. Se eligió como blanco, una porción de la secuencia del gen del ARNr 18s y empleó el kit LAMP WarmStart®. El protocolo consistió en incubación por 30 minutos a 65°C, seguido de inactivación por 5 minutos a 85°C y la lectura por observación directa de turbidez. Los resultados fueron corroborados por electroforesis en gel de agarosa al 2% con un marcador de ADN fluorescente. Las muestras a la vez fueron analizadas por PCR convencional. Resultados: en los tubos de los controles positivos, se observó una turbidez blanquecina producto de la formación de precipitados de pirofostato de magnesio y consecuencia de la reacción de amplificación de ADN presente. En los tubos de las muestras analizadas, así como del control negativo, no se observó turbidez. La electroforesis en gel de agarosa al 2% de los productos de amplificación por LAMP del control positivo, mostraron la escalera de bandas fluorescentes correspondiente al resultado positivo y el control negativo no presentó bandas o señal fluorescente salvo la que generan los primers que no participaron en la reacción. Ninguna de las muestras analizadas, caracterizadas como seropositivas por presentar anticuerpos contra el parásito, mostró bandas fluorescentes, lo que indicaría ausencia del parásito en las muestras. El PCR convencional de ADN kinetoplastidial y ADN satelital resultó negativo para todas las muestras examinadas. Conclusiones: ninguno de los casos seropositivos analizados por LAMP evidenció ADN de T. cruzi, resultado concordante al obtenido por PCR convencional. Tanto para el diagnóstico como en la investigación epidemiológica, es una buena alternativa para detección rápida de ADN de T. cruzi en laboratorios que no presentan equipos especializados. [ABSTRACT FROM AUTHOR]