부산대학교 도서관

Des protocoles pour l'analyse et le triage chromosomiques au moyen de la cytométrie en flux (cytogénétique en flux) ont été développés pour le seigle (Secale cereale L.). Des suspensions de chromosomes intacts ont été préparées par homogénéisation d'apex racinaires synchrones suite à une fixation modérée à l'aide de formaldéhyde. Des histogrammes de l'intensité relative de la fluorescence, obtenus suite à l'analyse des chromosomes colorés au DAPI (caryotypes en flux), ont été analysés et le contenu en ADN des pics chromosomiques a été déterminé. Le chromosome 1R pouvait être identifié suite à un caryotypage en flux chez le cultivar S. cereale 'Imperial'. Les autres chromosomes du seigle (2R–7R) pouvaient être identifiés et séparés des autres au sein de lignées d'addition blé–seigle. L'analyse de lignées avec des caryotypes reconstruits a permis de montrer qu'il était possible de trier des chromosomes à translocation. Des chromosomes B surnuméraires pouvaient être séparés des autres chez une population expérimentale du seigle et chez le cultivar S. cereale 'Adams'. Les chromosomes triés par cytométrie en flux ont été identifiés par hybridation in situ en fluorescence (FISH) à l'aide de sondes constituées de diverses séquences répétées. L'accumulation sur une lame d'un grand nombre de chromosomes d'un seul type a facilité la détection de variants chromosomiques rares par analyse FISH avec des sondes spécifiques. Des amplifications avec des amorces spécifiques d'un chromosome ont confirmé l'identité des chromosomes ainsi triés et suggèrent qu'il s'agit là d'un outil intéressant pour la cartographie physique. La possibilité de trier un grand nombre de chromosomes ouvre la voie à la construction de banques génomiques à grands inserts et spécifiques d'un seul chromosome chez le seigle. [ABSTRACT FROM AUTHOR]