학술논문

广东地方品种鸡ALV-K分子流行病学及gag基因12 bp缺失对病毒体外复制能力影响的研究 / Study on Molecular Epidemiology of ALV-K in Guangdong Local Breed Chickens and the Effect of 12 bp Deletion of gag Gene on Virus Replication Ability in vitro
Document Type
Academic Journal
Source
畜牧兽医学报 / Acta Veterinaria Et Zootechnica Sinica. 53(11):3956-3966
Subject
K亚群禽白血病病毒
地方品种鸡
分子流行病学
gag基因
感染性克隆
Language
Chinese
ISSN
0366-6964
Abstract
为了解目前广东地方品种鸡K亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-K)的分子特征,于2020-2021年,从广东7家(A~G)正在进行外源性ALV净化的、外观健康的规模化种禽场核心群采集抗凝血样品共8 042份.通过血浆接种DF-1细胞、ELISA检测p27抗原,共检出357份阳性,并对ELISA结果S/P值0.2~0.6的150份阳性样品进行PCR鉴定和env基因测序,共分离到32株ALV-K,进一步选取16株进行全基因组扩增及测序分析.结果显示,这16株ALV-K全长为7 481~7 496 bp,基因组符合5'-LTR-UTR-gag-pol-env-UTR-LTR-3'典型的反转录病毒结构,不含已知致癌基因;其gp85基因与ALV-K参考株位于同一进化分支上且相似性最高(>94.0%);其pol、gp37基因均比较保守,与ALV各亚群相似性均较高(>94.0%);其LTR与内源性ALV及大多数ALV-K参考株相似性最高(91.4%~99.5%),且LTR U3区与内源性ALV LTR有相同的转录调控元件;此外,观察到31.3%(5/16)的分离株在gag基因373-384位核苷酸存在12 bp的缺失,进一步以缺失株GD20 JM10为亲本,通过PCR分段扩增和同源重组的方法分别构建了缺失株(rGD20 JM10)和回补株(rGD20 JM10 A12)的cDNA克隆,将其转染DF-1细胞,ELISA和IFA结果表明,病毒拯救成功;体外复制动力学结果显示,两者差异不显著(P>0.05).本研究所调查的广东7个种禽场的ALV-K流行株均携带内源性LTR,且分子特征较为稳定,故采用更敏感的检测技术在开展ALV净化时尤为重要,此外,gag基因373-384位核苷酸的规律性缺失对病毒的体外复制能力无显著影响.