부산대학교 도서관

In this study, hatched male broiler chicks(Ross) were fed on a basal diet and LPS was administered via intraperitoneal injection three times every other day, on the 9th, 11th and 13th days of the experiment, and then PBMC and splenocytes were isolated on day 14. The degree of alama blue reduction was evaluated at 4, 24, 48, 96 and 120 h in the splenocytes, and at 4, 8, 12, 24 and 48 h for PBMC of incubation after the addition of alama blue solution to the media. The cell numbers used in this experiment were 103, 104 and 105 cells per well, and the con A levels were 0.0, 1.0, 5.0, and 10.0 ㎍ per ml of medium. 1. The degree of alama blue reduction was found to increase in a linear fashion with increasing incubation time and cell numbers, for both splenocytes and PBMC. 2. During acute phase response, the degree to which alama blue was reduced was significantly elevated (p<0.05) at an incubation time of 24 hr for the splenocytes, 4 hr for PBMC, and a cell number of 105 cells per well, respectively. 3. The raised reduction of alama blue to control was linear with Con A levels in medium, and higher reduction in Con A 10.0 ㎍ relative to 1.0 or 5.0 ㎍ in ml medium was shown 4. The medium with autologous serum evidenced a significantly (p<0.05) higher reduction of alama blue relative to FBS. 5. Splenocytes and PBMC from the LPS-injected birds evidenced significantly higher levels of alama blue reduction regardless of incubation time, number of cells, level of Con A added, or serum type, as compared with what was observed in normal birds. The results indicated that the assay conditions for proliferative activity using the alama blue method in birds in which the acute phase response had been activated via intraperitoneal LPS injection requires 4 hrs of incubation for PBMC, 24 hrs of incubation for splenocytes, and 10㎍ of Con A per ml of medium.
급성기 반응중인 가금의 비장세포와 PBMC 증식도를 alamar blue(alamar blue) 환원량으로 측정하기 위한 조건들을 조사하였다. 갓 부화한 육계병아리(Ross 종) 수컷에 기초사료를 급여하고, 9, 11 및 13일령에 각각 복강내 LPS를 주입으로 급성기 반응중인 14일령 육계병아리의 혈액에서 PBMC와 비장에서 비장세포를 분리하였다. alamar blue 환원량은 비장세포에서는 4, 24, 48, 96 및 120시간, PBMC는 4, 8, 12, 24 및 48시간에 그리고 웰당 103, 104 및 105개로 분배하고, 배양액 ml 당 0.0, 1.0, 5.0 및 10.0㎍의 Con A를 첨가하며, 배양액 중 2.5%의 자가혈청과 FBS를 첨가하여 측정하였다. 1.alamar blue 환원량은 배양시간의 경과(R2=0.825~1.000)에 따라 그리고, 세포수(R2= 0.999)의 증가에 따라 직선적으로 증가하였다.2. 급성기 반응중인 병아리에서, alamar blue 환원량은 대조구에 비해 비장세포는 24시간이후, PBMC는 4시간이후부터 105개의 세포접종시 유의하게(p<0.05) 높았다.3.급성기 반응중인 병아리의 비장세포와 PBMC에서 alamar blue 환원량은 Con A 농도에 관계없이 대조구에 비해 높았으며, 배양액 ml 당 Con A 1.0 또는 5.0 ㎍ 첨가에 비해 10.0㎍ 첨가시 유의하게(p<0.05) 높았다.4. 그리고, 배양액중 2.5%의 자가혈청은 급성기 반응과 관계없이 FBS에 비해 alamar blue 환원량을 유의하게 높였다. 본 연구는 alamar blue 환원량 평가에 의한 급성기 반응중인 가금의 비장세포와 PBMC의 증식도 측정에는 alamar blue 첨가 후 PBMC는 4시간, 비장세포는 24시간 배양, 세포수는 웰 당 105개, 그리고, Con A는 배양액 ml 당 10.0 ㎍이 적당하다는 것을 나타낸다.