부산대학교 도서관

The polymerase chain reaction (PCR) was developed using infectious laryngotracheitis virus (ILTV) primers made from a portion of the ILTV thymidine kinase gene. DNA from various ILTV field isolates, from the USDA challenge strain of ILTV, and from commercial ILTV vaccines was specifically amplified. No amplification occurred using template DNA from uninfected chicken-embryo liver cells (CELC), several nonavian alphaherpesviruses, Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae, Pasteurella hemolytica, Escherichia coli, a group I avian adenovirus, fowl poxvirus, or a psittacid herpesvirus. The 647-base pair-amplified ILTV PCR product was labeled to create a nonradioactive, biotinylated DNA probe. Hybridization using the probe detected ILTV DNA. Both PCR and hybridization yielded positive results with ILTV DNA but not with the DNA of other pathogens. Hybridization was specific for ILTV using a stringent salt solution for a 30-min wash step or a somewhat less stringent salt solution for a 60-min wash step. However, slight hybridization occurred with CELC DNA when the less stringent salt solution was used in a 30-min wash step. /// Se desarrolló una prueba de reacción en cadena por la polimerasa usando iniciadores del virus de laringotraqueítis infecciosa construídos de una porción de la enzima timidina kinasa del genoma del virus. Se amplificó el ácido desoxiribonucléico (ADN) de varios virus de laringotraqueítis infecciosa: virus aislados de campo, virus vacunales o de la cepa de desafío del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos. No hubo amplificación cuando se usó el ADN de células hepáticas de embrión de pollo no infectadas, de varios virus herpes del grupo alfa de origen diferente al aviar, del Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae, Pasteurella hemolytica, Escherichia coli, de un grupo de adenovirus aviares del grupo I, del virus de viruela y de un virus herpes de psitácidas. El producto de 647 pares de bases del virus de laringotraqueítis, amplificado por medio de la reacción en cadena por la polimerasa, fue marcado para crear una sonda de ADN no radiactiva, biotinilada. La hibridación con el uso de esta sonda detectó el ADN del virus de la laringotraqueítis. Tanto la reacción en cadena por la polimerasa como la hibridación produjeron resultados positivos con el ADN del virus de laringotraqueítis infecciosa, pero no con el ADN de los otros patógenos. La hibridación fue específica para el virus de laringotraqueítis infecciosa usando una solución salina fuerte durante 30 minutos o con una solución salina menos concentrada por 60 minutos. Sin embargo, ocurrió una ligera hibridación con el ADN de las células hepáticas de embrión de pollo cuando se usó una solución salina menos concentrada en un lavado de 30 minutos.