학술논문
弓形虫鸡尾酒DNA疫苗的免疫保护作用研究 / Study on immune protection of Toxoplasma gondii cocktail DNA vaccine
Document Type
Academic Journal
Author
何金灵; 杜荣起; 郑淇月; 宋淇淇; 张东超; 金天明; He Jinling; Du Rongqi; Zheng Qiyue; Song Qiqi; Zhang Dongchao; Jin Tianming
Source
天津农学院学报 / Journal of Tianjin Agricultural College. 30(3):40-46
Subject
Language
Chinese
ISSN
1008-5394
Abstract
研究旨在构建弓形虫鸡尾酒DNA疫苗并评价其对小鼠的免疫保护效果.研究将编码弓形虫棒状体蛋白ROP5、ROP9 和ROP17 的基因分别构建至真核表达载体pVAX1 上,获得重组真核表达质粒pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP9 和pVAX1-ROP17,将上述质粒进行PCR和双酶切验证,并通过Western blot检测重组质粒在真核细胞中表达.将三种重组质粒按 1∶1∶1 的比例混合后,取100 μg通过腿部肌肉注射免疫小鼠,加强免疫后,检测小鼠血清抗体、脾淋巴细胞增殖及细胞因子水平,并接种弓形虫RH强毒株进行攻毒,评价免疫后小鼠的保护效果.真核表达质粒pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP9和pVAX1-ROP17经PCR和双酶切验证的结果显示:分别在1 686 bp、1 128 bp和1 836 bp处出现特异性目的条带;Western blot检测结果发现,在约为 62、41 和 68 kDa处出现目的条带,分别与预期目的蛋白ROP5、ROP9 和ROP17 的分子量大小相符.与空载体组和生理盐水组小鼠相比,疫苗免疫组小鼠产生的血清中抗体IgG和淋巴细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL-6 水平、脾脏淋巴细胞增殖的刺激指数(SI)均极显著升高(P＜0.01),且接种弓形虫RH强毒株后,免疫组小鼠的存活时间(16.1±2.07)比对照组小鼠存活时间(9.2±0.74 或 9.0±0.77)极显著延长(P＜0.01).研究结果表明,成功构建的弓形虫鸡尾酒DNA疫苗pAX1-ROP5/ROP9/ROP17 能激发小鼠的体液免疫反应和细胞免疫反应,并增强小鼠对弓形虫感染的抵抗能力.研究结果为弓形虫新型疫苗研制提供借鉴和参考.